Evaluation of CD4+CD25+ T lymphocyte response time kinetics in patients with chronic Chagas disease after in vitro stimulation with recombinant Trypanosoma cruzi antigens

Introduction CD4+CD25+ T lymphocytes have been implicated in the regulation of host inflammatory response against Trypanosoma cruzi, and may be involved in the clinical course of the disease. Methods Peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic Chagas disease were cultured in the presence of T. cruzi recombinant antigens and assayed for lymphocytes at distinct time points. Results It was possible to differentiate clinical forms of chronic Chagas disease at days 3 and 5 according to presence of CD4+CD25+ T cells in cell cultures. Conclusions Longer periods of cell culture proved to be potentially valuable for prospective evaluations of CD4+CD25+ T lymphocytes in patients with chronic Chagas disease. .

Chagas disease in the State of Pernambuco, Brazil: analysis of admissions and mortality time series / Doença de Chagas no Estado de Pernambuco, Brasil: análise de séries históricas das internações e da mortalidade

INTRODUCTION: A time series study of admissions, deaths and acute cases was conducted in order to evaluate the context of Chagas disease in Pernambuco. METHODS: Data reported to the Information Technology Department of the Brazilian National Health Service between 1980 and 2008 was collected for regions and Federal Units of Brazil; and microregions and municipalities of Pernambuco. Rates (per 100,000 inhabitants) of hospitalization, mortality and acute cases were calculated using a national hospital database (SIH), a national mortality database (SIM) and the national Information System for Notifiable Diseases (SINAN), respectively. RESULTS: The national average for Chagas disease admissions was 0.99 from 1995 to 2008. Pernambuco obtained a mean of 0.39 in the same period, with the highest rates being concentrated in the interior of the state. The state obtained a mean mortality rate of 1.56 between 1980 and 2007, which was lower than the national average (3.66). The mortality rate has tended to decline nationally, while it has remained relatively unchanged in Pernambuco. Interpolating national rates of admissions and deaths, mortality rates were higher than hospitalization rates between 1995 and 2007. The same occurred in Pernambuco, except for 2003. Between 2001 and 2006, rates for acute cases were 0.56 and 0.21 for Brazil and Pernambuco, respectively. CONCLUSIONS: Although a decrease in Chagas mortality has occurred in Brazil, the disease remains a serious public health problem, especially in the Northeast region. It is thus essential that medical care, prevention and control regarding Chagas disease be maintained and improved.

INTRODUÇÃO: Foi realizado estudo de séries históricas de internações, óbitos e casos agudos por doenças de Chagas objetivando avaliar o contexto desta enfermidade em Pernambuco. MÉTODOS: Foram coletados dados notificados de 1980 a 2008 ao Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS/MS) para regiões e unidades federativas do Brasil, microrregiões e municípios pernambucanos. As taxas (por 100.000 habitantes) de internações, mortalidade e casos agudos foram obtidas por consulta ao Sistema de Informações Hospitalares (SIH), Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM) e Sistema de Informações de Agravos de Notificação (SINAN), respectivamente. RESULTADOS: A média de internações nacional por doença de Chagas ficou em 0,99 no período de 1995 a 2008. Pernambuco, neste intervalo, apresentou média de 0,39, com as maiores taxas concentradas no interior do estado. Este estado obteve média de óbitos 1,56 entre 1980 e 2007, valor inferior a brasileira (3,66). O país demonstrou declínio de óbitos na análise de tendência, com Pernambuco encontrando-se em estado estacionário para esta taxa. Interpolando os dados referentes a internações e óbitos, evidenciou-se mortalidade em valores superiores as taxas de internações nacionais, entre 1995 e 2007. O mesmo fato ocorreu em Pernambuco, exceto em 2003. Entre 2001 e 2006, a taxa de casos agudos foi de 0,56 e 0,21 respectivamente para Brasil e para Pernambuco. CONCLUSÕES: Mesmo o Brasil demonstrando redução na mortalidade, a doença permanece como grave problema de saúde pública, principalmente no nordeste. Desta forma, é fundamental a manutenção e melhoria das ações de atenção médica, controle e prevenção já existentes.

Avaliação das células T regulatórias CD4+CD25+FoxP3+ nas formas clínicas da doença de Chagas após estímulo in vitro com antigenos recombinantes CRA e FRA de Trypanosoma cruzi / Evaluation of CD4+CD25+FoxP3+ regulatory T cells in the forms of Chagas disease after in vitro stimulation with CRA and FRA recombinant antigens of Trypanosoma cruzi

Muitos estudos têm associado à resposta imune do hospedeiro ao Trypanosoma cruzi com as diferentes manifestações clínicas da doença de Chagas crônica. Contudo, pouco se sabe sobre o papel das células T regulatórias CD4+CD25+FoxP3+ na infecção humana. Este trabalho teve como objetivo avaliar a resposta imune específica de indivíduos portadores da doença de Chagas frente à CRA (Antígeno Repetitivo Citoplasmático) e FRA (Antígeno Repetitivo Flagelar), relacionando a presença dos linfócitos T regulatórios com formas clínicas crônicas da doença. A população do estudo foi selecionada no Ambulatório de Doença de Chagas do Hospital Universitário Oswaldo Cruz/Universidade de Pernambuco, sendo constituída por portadores das formas cardíaca severa (FCS) (n=11) e indeterminada (FI)(n=20) da doença e de indivíduos não infectados (NI)(n=9). Células mononucleares de sangue periférico, obtidas do sangue coletado dos participantes, foram cultivadas na presença de CRA e FRA. A presença de linfócitos Tregs foi avaliada através da técnica de citometria de fluxo. Portadores da FI apresentaram maiores níveis de células T CD4+CD25+ que os indivíduos com a FCS. Também verificamos maior freqüência da molécula CD25 em linfócitos T CD4+ de pacientes com a FI. Não verificamos diferença na expressão de FoxP3 e na produção de IL10 por linfócitos T CD4+CD25+ entre os grupos avaliados. Entretanto, foi observada correlação positiva entre CD25 e IL10 no grupo de indivíduos portadores da FI, após estímulo com FRA. Nossos achados sugerem que linfócitos T CD4+CD25+ estão envolvidos no controle dos efeitos deletérios ocasionados pela resposta imune do hospedeiro contra o T. cruzi. Contudo, o mecanismo de ação das células T CD4+CD25+FoxP3+, específicas ao CRA e ao FRA, principalmente quanto a produção de citocinas, deve ser avaliado na doença de Chagas crônica.

A comparative analysis of the suitability of different peripheral blood samples for reverse transcriptase polymerase chain reaction / Análise comparativa da adequação de diferentes amostras de sangue periférico em ensaios de reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa

Venipuncture is one of the easiest clinical procedures to obtain viable blood samples to evaluate gene expression using mRNA analysis. However, the use of this sample type in reverse transcriptase polymerase chain reaction tests (RT-PCR) without prior treatment is controversial. We therefore propose to compare the suitability of different peripheral blood samples (whole blood without treatment, whole blood with hemolysis, peripheral blood mononuclear cells and frozen whole blood) for RT-PCR analysis. The results showed that, despite the blood sample being peripheral, it is possible to extract a fair amount of RNA and perform target gene amplification. Thus, peripheral blood without prior treatment could be used to investigate the gene expression using Real Time PCR.

A punção venosa representa um dos procedimentos clínicos mais simples na obtenção de amostras de sangue periférico e avaliação da expressão gênica através da análise do RNA mensageiro. Contudo, a utilização desta amostra, sem um tratamento prévio, em ensaios de Transcrição Reversa (RT-PCR) é controverso. Desta forma, propomos comparar a adequação de diferentes amostras de sangue periférico (sangue total sem tratamento, sangue total após hemólise, células mononucleares do sangue periférico e sangue total congelado) em ensaios de Transcrição Reversa Os resultados mostraram que independente da amostra de sangue periférico é possível extrair RNA em quantidade adequada e realizar a amplificação do gene alvo. Desta forma, o sangue periférico sem tratamento prévio pode ser utilizado em abordagens que envolvam a avaliação da expressão gênica por reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real.

Viabilidade, confirmação taxonômica e detecção enzimática de espécies de Acremonium preservadas sob óleo mineral na Coleção de Culturas University Recife Mycology / Viability, taxonomic confirmation and enzymatic detection of Acremonium species preserved under mineral oil in the URM Culture Collection

Enzimas hidrolíticas secretadas por fungos têm um papel importante na patogenicidade das infecções. Objetivando avaliar a atividade enzimática foram testados 31 isolados de Acremonium mantidos na Coleção de Culturas University Recife Mycology. Fragmentos das culturas foram transferidos para caldo glicosado para reativação e posterior crescimento em meio ágar batata dextrose, para verificar viabilidade, pureza e confirmação taxonômica pela observação das características macroscópicas e microscópicas. Para detecção enzimática foram utilizados substratos de caseína do leite e gelatina para protease, amido para amilase e lecitina de soja para fosfolipase. Das 31 culturas, 26 (83,9 por cento) mantiveram-se viáveis e 24 (92,3 por cento) foram confirmadas taxonomicamente. Das 24 culturas, 12 (50 por cento) apresentaram atividade proteásica, duas (16,7 por cento) em caseína do leite, uma (8,3 por cento) em gelatina e nove (75 por cento) em ambos os substratos; 16 (66,7 por cento) degradaram amido. Nenhuma cultura apresentou atividade fosfolipásica. Conclui-se que espécies de Acremonium são capazes de produzir enzimas envolvidas na patogenicidade das infecções fúngicas.

Hydrolytic enzymes secreted by fungi play an important role in the pathogenesis of infection. With the aim of evaluating the enzymatic activity, 31 isolates of Acremonium stored in the University of Recife Mycology (URM) Culture Collection were tested. Culture fragments were transferred to glycoside broth for reactivation and further growth in potato dextrose agar medium in order to investigate viability and purity and to confirm the taxonomy through observing the macroscopic and microscopic characteristics. To detect enzymes, milk casein and gelatin were used as substrates for proteinase, starch for amylase and soy lecithin for phospholipase. Among the 31 cultures, 26 (83.9 percent) remained viable and 24 (92.3 percent) were confirmed taxonomically. Out of these 24 cultures, 12 (50 percent) presented proteinase activity, of which two (16.7 percent) were on milk casein, one (8.3 percent) on gelatin and nine (75 percent) on both substrates; 16 (66.7 percent) degraded starch. None of the cultures presented phospholipase activity. It was concluded that Acremonium species are able to produce enzymes that are involved in the pathogenicity of fungal infections.